狂犬病病毒核蛋白基因的克隆序列分析及其在E.coli中的高效表达

• 作者: 夏咸柱 薛琳 高明华
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 狂犬病病毒 核蛋白基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 6-9
• 页数: 4页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-6005.2006.11.002

摘要

对狂犬病病毒(RV)ERA株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列分析.根据GenBank中已发表的RV N基因序列,设计合成了1对特异性引物,对RV ERA株N基因进行了RT-PCR扩增.将PCR产物纯化后与pMD18-T连接得到重组质粒pMD-N,并进行核苷酸序列测定.结果该基因全长1 353 bp,编码450个氨基酸.RV ERA株与CVS-11、PV-11、SRV9和SAD-B19株相比,核苷酸的同源性分别为98%、98.3%、99%、99.6%,推导的氨基酸的同源性分别为98%、99%、99%、99.6%.将pMD-N双酶切,回收目的基因片段并克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET-N;将其转化表达菌BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达.结果重组菌裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为53 kDa的重组蛋白,经凝胶薄层扫描分析,重组蛋白表达量占菌体蛋白的56.8%,Western-blot结果显示该重组蛋白能与RV多克隆抗体发生特异性反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏咸柱	军事医学科学院军事兽医研究所	61	402	11.0	15.0
2	薛琳	吉林大学畜牧兽医学院	3	37	3.0	3.0