狂犬病毒核蛋白基因的克隆表达及其免疫原性

• 作者: 姚文荣 张永振 徐兰 李明慧
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病毒 核蛋白基因 杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 514-517
• 页数: 4页
• 分类号: R511
• 字数: 3684字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.06.007

摘要

目的 构建狂犬病毒核蛋白(NP)基因的重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中表达出具有免疫原性的抗原,用于狂犬病的检测及诊断.方法 应用RT-PCR方法扩增ERA株狂犬病毒NP基因后克隆到PCR[R]2.1TA载体,转化One ShortTMTOP10感受态细胞构建TA克隆载体,并与pFastBacTM1转座质粒载体分别用KpnI和NotI双酶切,用T4连接酶连接,构建pFast ERA-NP重组转座质粒,经双酶切、PCR扩增及插入序列方向鉴定后,转化到DH10BacTME.coli感受态细胞,经三抗培养基筛选和PCR扩增鉴定后获得重组Bacmid质粒,将重组Bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒毒液,并继续扩增重组杆状病毒,以第三代毒液感染Sf9昆虫细胞,96h收获细胞,用直接免疫荧光(DFA)、SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行检测和分析.结果 构建了舍有ERA NP基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中获得表达.结论 本研究成功表达出了具有免疫原性的狂犬病毒核蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张永振	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	50	525	11.0	22.0
2	李明慧	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	12	36	3.0	5.0
3	姚文荣	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	6	17	2.0	4.0
4	徐兰	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	2	49	2.0	2.0