人噬菌体抗体库中异常重组子的分析

• 作者: 化冰 王刚 王琰
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人抗体可变区基因 抗体库 限制性内切酶
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 63-66
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3564字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2002.01.027

摘要

目的阐明在噬菌体抗体库技术中,选择适当限制性内切酶酶切位点的重要性,并介绍人抗体可变区胚系基因的限制酶谱.方法从正常人外周血提取淋巴细胞总RNA,用RT-PCR 扩增IgM和IgG1的Fd片段及κ链基因,重组到载体p3MH中构建噬菌体抗体库.以限制性内切酶消化及电泳分析所获重组克隆;用PCGENE软件分析人抗体可变区胚系基因的限制性内切酶谱.结果在构建抗体库的过程中,发现高频率的异常重组子克隆.经序列分析证实,在人VH 基因片段中,存在用于克隆轻链的Sac I位点.对人全部功能性可变区胚系基因进行限制性内切酶谱分析,发现人VH 第Ⅳ家族的11个成员均含有Sac I位点,其它限制酶切位点在抗体可变区胚系基因中具有不同的出现率.结论构建抗体库时,用于重组可变区基因的酶切位点,对库的构建具有重要的影响,因此,应对表达载体所用的限制性内切酶进行精心选择.现在比较广泛使用的pCOMB系统载体不利于良好性能抗体库的构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王琰	海军总医院中心实验室	59	302	9.0	14.0
2	化冰	海军总医院中心实验室	13	111	6.0	10.0
3	王刚	海军总医院中心实验室	11	63	4.0	7.0