蚯蚓纤溶酶新基因PV242的克隆与表达

• 作者: 付士红 侯云德 孙兆军 徐义辉 柴玉波 梁国栋 陈飞
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: 双胸蚓属 蚯蚓纤溶酶 蛋白质测序 克隆 重组表达
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 610-614
• 页数: 5页
• 分类号: Q812|R972
• 字数: 3824字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2002.04.023

摘要

从我国特有的双胸蚓属(Lumbricus bimastus)蚯蚓体内提取到一种有纤维蛋白平板溶解活性的蛋白质,采用聚偏二氟乙烯膜(PVDF)微量测序法测得蛋白质的N端氨基酸序列,依此设计简并引物,通过RT-PCR获得其对应cDNA.该cDNA全长888 bp,1～726位核苷酸对应读码框架(ORF),编码含242个氨基酸的成熟肽.终止子(TAG)位于cDNA的727～729位,其余核苷酸序列为3′端非编码区.成熟肽命名为蚯蚓纤溶酶PV242.蛋白质预测得知蛋白质等电点为4.33,含组氨酸(His44)及丝氨酸 (Ser191)两个活性位点;蛋白质由两个结构域组成,表面有活性裂隙;该蛋白质属丝氨酸蛋白酶超家族胰蛋白酶类.经国际基因库等多种查询比较未见PV242基因的报道,为首次发现的新基因,在国际基因库的输入号为GenBank AF109648.随后构建了pTrxFUS-PV242重组质粒,并在大肠杆菌GI724中获得融合蛋白TrxA/PV242的可溶性表达,采用离子交换层析法纯化表达蛋白,融合蛋白有纤维平板溶解活性.