人和鼠脑cDNA文库的建立以及全长cDNA的批量分离

• 作者: 刘瑾 周严 周海军 强伯勤 强华 彭小忠 胡松年 袁建刚 谈昕煜 黄晓玮
• 来源期刊: 自然科学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: cDNA文库 脑 EST
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 学术论文
• 页码范围: 377-380
• 页数: 4页
• 分类号: Q7
• 字数: 3697字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-008X.2002.04.008

摘要

应用λZAP Express cDNA文库构建试剂盒构建了人3个月和8个月胎儿脑及大小鼠脑cD-NA文库.第2链cDNA经Sepharose CL-4B凝胶过滤层析后去除了较小的片段,使大片段cDNA具有较高的克隆效率.所建立的文库具有较长的插入片段.合并不同长度范围的人3个月胎儿脑cDNA片段,分别克隆入文库载体,获得了长片段、中片段、短片段及合并cDNA文库.从分级文库中各随机挑取300个克隆,经载体引物PCR扩增后,测定5'末端序列,一共获得894个表达序列标签(EST)序列.根据同源性比较结果将感兴趣的克隆环化后测定全长cDNA序列,得到了12条新的全长cDNA.这些文库的建立以及新EST,cDNA的分离为文库筛选和获得脑表达的新基因奠定了基础.