无花果曲酶植酸酶基因phyA的克隆、序列分析及表达

• 作者: 吴作为 姜洪州 孙建 晏晶 李明刚 李桂兰 王隆飞 祝建洪 陈功
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 无花果曲酶 植酸酶 phyA基因 酿酒酵母 表达
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 520-524
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3313字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2003.05.016

摘要

用RT-PCR方法从无花果曲酶(Aspcrgillus ficuum 3.4322)中扩增出1条约1.4kb的特异性条带,并将其克隆到pMD18-T载体中.DNA序列测定表明,目的片段为不含信号肽的植酸酶编码序列,全长1 347bp,编码448个氨基酸.该基因序列已在GenBank注册(注册号为:AF537344).将该基因克隆到酵母表达载体pYES2中,构建成不带信号肽phyA基因的重组表达载体pYPA2.用醋酸锂法将pYPA2转进Ura缺陷型的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeINVScl),筛选获得含植酸酶基因的酵母转化子.经半乳糖诱导表达后,用磷钼蓝显色(AMES)法对酵母菌体进行酶活性测定,测出了明显的植酸酶活性,pYPA2胞内植酸酶活性约11.55U/L,表明无花果曲酶phyA基因能在酿酒酵母中表达.