黑曲霉植酸酶基因phyA的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 夏润玺 王媛媛 王学英 闻雅男
• 来源期刊: 沈阳农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑曲霉 phyA基因 大肠杆菌 克隆载体 高效表达
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 335-338
• 页数: 4页
• 分类号: Q949.331
• 字数: 3136字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1700.2009.03.018

摘要

为获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生物生物制剂,从自行筛选的黑曲霉中提取RNA.通过反转录合成模板cDNA,根据pyhA成熟肽编码序列设计出一对引物,PCR扩增phrA,对扩增片段进行了克隆,通过限制性内切酶酶切分析、DNA测序证明phyA基因克隆成功.从pBS-T-phyA克隆中获取phya编码序列,将其与pET28a+质粒连接,构建pET28a+-phyA重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.本研究成功克隆phyA,该基因全长1404bp,以ATG为起始密码子,TGA为终止密码子,编码467个氨基酸组成的多肽.SDS-PAGE电泳结果表明,phyA在大肠杆菌中成功表达,成熟植酸酶的分子量约为51kDa.在0.4g·L-1的IPTG的诱导下,植酸酶活性最大(1174U).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王学英	沈阳农业大学生物科学技术学院	45	237	9.0	12.0
2	王媛媛	沈阳农业大学生物科学技术学院	92	558	12.0	17.0
3	夏润玺	沈阳农业大学生物科学技术学院	41	214	9.0	13.0
4	闻雅男	沈阳农业大学生物科学技术学院	1	2	1.0	1.0