大肠杆菌植酸酶appA基因的克隆、表达及性质分析

• 作者: 冉瑞法 冯蔚 刘淑娟 李镇刚 肖圣燕
• 来源期刊: 江西农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 植酸酶 appA基因 大肠杆菌 克隆 表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 1-6,16
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 5032字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19386/j.cnki.jxnyxb.2017.11.01

摘要

通过维生素C-钼蓝法,从饲喂青饲料的猪的粪便中分离筛选出1株产较高活性appA植酸酶的大肠杆菌菌株;采用PCR方法从该菌株的基因组中克隆获得植酸酶appA基因,测序结果显示PCR产物全长1447 bp,该植酸酶基因编码区有1296个核苷酸,编码432个氨基酸.将该编码区克隆至pPIC9K载体,并转化入巴斯德毕赤酵母进行甲醇诱导表达,获得了约55 kDa的特征条带,表达96 h后其上清液的酶活力达到368 U/mL.经Ni亲和柱纯化后进行部分酶学性质分析,结果表明:重组appA植酸酶的最适反应温度为55℃,温度高于60℃后其酶活下降明显;其最适pH值为5.0.