多位点突变提高大肠杆菌植酸酶AppA热稳定性

• 作者: 付月君 姚明泽 宋玛丽 梁爱华 王茜 胡风云
• 来源期刊: 高技术通讯
• 关键词: 大肠杆菌植酸酶AppA 定点突变 热稳定性 N-糖基化 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 先进制造与自动化技术
• 页码范围: 1306-1313
• 页数: 8页
• 字数: 4114字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3772/j.issn.1002-0470.2014.12.012

摘要

为提高大肠杆菌植酸酶AppA(一种已得到广泛应用的饲料添加剂,其酶活高,pH作用范围广,但热稳定性较差)热稳定性,在appA基因上组合突变了W46E、Q62W、A73P、K75C、S146E、R159Y、N204C、Y255D、Q258N和Q349N等10个位点,突变后的基因命名为appAM10.将野生型appAppA和突变体appAM10ppAM10基因转入毕赤酵母GS115进行表达,并对重组蛋白AppA和AppAM10进行了酶学性质研究与比较.结果表明:AppAM 10分子量约为55kDa,比活性为3022U/mg,AppAM10的Km=330μmol/L,Vmax=3147 U/mg.AppAM10的最适pH值为4.5,最适反应温度为65℃.与野生型的AppA的最适pH无明显区别,比AppA的最适温度提高了5℃.经90℃孵育15min后,AppA完全失活,而AppAM10仍残留17.5％的活性,Tm值提高约8℃,说明上述10个位点的组合突变有利于提高大肠杆菌植酸酶AppA热稳定性,其中与N-糖基化有关的N204C、Q258N和Q349N3个位点可能起着重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付月君	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	24	110	6.0	9.0
2	梁爱华	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	97	555	13.0	18.0
3	王茜	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	46	537	13.0	22.0
4	胡风云	山西省人民医院神经内科	65	189	8.0	9.0
5	姚明泽	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	5	11	2.0	3.0
6	宋玛丽	山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室	4	7	2.0	2.0