4-1BBL基因真核表达载体构建及在肝癌细胞中表达的研究

• 作者: 俞悦 印洁 李国强 王学浩
• 来源期刊: 中华肿瘤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 癌,肝细胞 基因重组 基因治疗 4-1BBL
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 328-331
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3937字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0253-3766.2003.04.005

摘要

目的研究含鼠源性4-1BBL真核表达载体体系的构建及其在大鼠肝细胞癌(HCC)细胞系CBRH7919中获得稳定、高效表达的方法.方法将4-1BBL全长cDNA亚克隆到真核表达载体PCI-neo中,获得4-1BBL定向插入重组子PCI-neo-4-1BBL,采用酶切法和测序法鉴定.用阳离子脂质体将PCI-neo-4-1BBL转染CBRH7919,经G418筛选,获得阳性克隆,命名为PCI-neo-4-1BBL-CBRH7919+细胞.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL在CBRH7919中的表达.结果 PCI-neo-4-1BBL经限制性内切酶切,电泳后显示有980 bp的4-1BBL目的基因片段和5.4 kb的线性化PCI-neo载体片段;重组子测序结果与Genbank中4-1BBL cDNA序列相符,证实构建成功.RT-PCR检测到4-1BBL在PCI-neo-4-1BBL-CBRH7919+细胞中获得稳定表达.结论重组4-1BBL真核表达载体构建正确,并在PCI-neo-4-1BBL-CBRH7919+细胞中获得稳定、高效表达.