乙型肝炎病毒C基因重组逆转录病毒的构建和在真核细胞的表达

• 作者: 丁传林 姚堃 张天泰 彭光勇 徐江英 许琳
• 来源期刊: 中华实验和临床病毒学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 逆转录病毒科 基因表达
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 81-84
• 页数: 4页
• 分类号: R511
• 字数: 3251字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2003.01.021

摘要

目的构建含HBV C基因的重组逆转录病毒以用于慢性乙型肝炎的免疫治疗.方法用PCR法扩增HBV的C基因片段,定向插入逆转录病毒质粒载体pLXSN中,重组质粒用脂质体转染包装细胞PT67,G418筛选抗性细胞,用抗性细胞培养上清液中的重组病毒感染NIH3T3、EL4和鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),用PCR检测目的基因的插入,用间接免疫荧光和流式细胞仪检测目的基因的表达,基因修饰的DC免疫C57BL/6鼠观察其诱导细胞免疫的能力.结果含HBV C基因重组质粒载体经PCR、酶切和序列分析鉴定为阳性,转染PT67后经G418筛选获得抗性细胞,抗性细胞培养上清液中含有重组逆转录病毒,病毒效价达3×105 CFU/ml,感染NIH3T3和EL4细胞后PCR鉴定含目的基因,间接免疫荧光、流式细胞仪鉴定有HBcAg表达,基因修饰后的DC免疫C57BL/6鼠能诱导特异性CTL应答.结论构建的HBV C基因重组逆转录病毒可将目的基因转移至真核细胞并得到有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张天泰	兰州医学院附属第一医院内科	9	58	4.0	7.0
2	徐江英		5	18	2.0	4.0
3	许琳		5	6	1.0	2.0