SARS冠状病毒S蛋白部分序列1的克隆与表达

• 作者: 余新炳 吴少庭 张仁利 秦莉 袁仕善 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SARS 冠状病毒 S蛋白 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: SARS
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1
• 字数: 2873字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2003.05.003

摘要

目的构建SARS冠状病毒S蛋白部分序列1(S1)的原核重组表达质粒,并分析其在大肠杆菌中的表达状况.方法采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码S1蛋白的基因片段,并克隆至pMD18-T载体上;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序列分析;将阳性克隆的插入片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌JM109,PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析截短型S蛋白的表达.结果RT PCR扩增出S1蛋白的特异片段,其阳性克隆的序列存在2处碱基突变第36位G变为A;第333位由C变为T),其中第36位为有义突变,第333位为同义突变;阳性克隆中截短型S1蛋白的基因片段被亚克隆到表达载体pGEX-4T-2而构建成重组表达质粒,并在JM109中表达了S1蛋白的融合蛋白,表达的蛋白能与GST免疫血清和SARS病人血清反应.结论成功构建了SARS冠状病毒S1蛋白的重组表达质粒,该质粒在大肠杆菌中表达了截短型S蛋白的融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山大学中山医学院	201	1352	17.0	28.0
2	张仁利		192	798	13.0	17.0
3	高世同		137	593	11.0	15.0
4	黄达娜		134	499	10.0	13.0
5	吴少庭		72	281	9.0	12.0
6	秦莉	华中科技大学同济医学院	20	82	6.0	8.0
7	袁仕善		20	86	5.0	8.0