SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化

• 作者: 吴少庭 张仁利 戴五星 林绮萍 潘晖榕 秦莉 袁仕善 雷明军 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SARS M 蛋白 基因表达 蛋白纯化 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1100-1102,1067
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1
• 字数: 2526字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.12.018

摘要

目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列, 构建原核重组表达质粒pET23a-M, 并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化.表达产物用Western Blot检测其抗原性.方法 RT-PCR 扩增M编码基因目的片段, 胶回收纯化, 插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α.序列测定后亚克隆至表达质粒载体pET23a, 构建重组体pET23a-M,转化大肠杆菌DH5α.筛选阳性克隆,以限制性酶切分析鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) 进行诱导表达.用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物.结果 PCR扩增出约675bp的特异性片段,与预期片段大小相符,测序鉴定无有义突变;所构建的pET23a-M 重组体阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物约27kD;表达产物经金属螯和层析纯化;免疫印迹表明表达产物能被混合的SARS病人恢复期血清识别.结论成功克隆了SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建了pET23a-M 表达质粒,诱导表达并纯化出了SARS冠状病毒M蛋白,并以免疫印迹鉴定.本研究的成功为进一步进行SARS病毒诊断试剂与疫苗的开发奠定了基础.