牛疱疹病毒Ⅰ型ul49(VP22)基因的序列分析及其表达

• 作者: 余晓岚 方六荣 肖少波 金梅林 陈焕春
• 来源期刊: 中国病毒学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛疱疹病毒I型 ul49基因 克隆 序列分析 表达
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 159-163
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2658字
• 语种: 英文

摘要

以牛疱疹病毒I型 (BHV-I) 国内地方分离株感染的细胞培养物制备PCR模板,扩增出大小约0.77kb 的ul49基因完整编码区片段,将扩增片段克隆到pMD18-T载体中,获得含ul49基因的重组质粒pMD-VP22.采用双脱氧末端终止法进行序列测定,发现与国外Cooper株ul49基因序列完全一致,说明ul49基因相当保守.进一步将BHV-I ul49完整编码区片段插入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C1中,获得分别与6xHis融合的原核表达质粒pET-28aVP22和与EGFP融合的真核表达质粒pEGFPVP22.将pET-28aVP22转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测发现在38kDa处有一条特异性的表达带.利用脂质体介导,将pEGFPVP22转染PK-15细胞,经G418加压筛选,获得稳定表达VP22的细胞克隆.在倒置荧光显微镜直接检测未固定的活细胞,发现pEGFPVP22转染细胞能发出很强的荧光并主要集中在细胞核中,而对照载体pEGFP- C1转染细胞的荧光分布于胞浆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈焕春	华中农业大学畜牧兽医学院	331	4866	36.0	53.0
2	肖少波	华中农业大学畜牧兽医学院	79	1105	19.0	30.0
3	金梅林	华中农业大学畜牧兽医学院	81	896	15.0	27.0
4	方六荣	华中农业大学畜牧兽医学院	75	818	15.0	24.0
5	余晓岚	华中农业大学畜牧兽医学院	5	28	3.0	5.0