大肠杆菌LTB与霍乱弧菌CTB基因的克隆和表达及鉴定

• 作者: 严杰 夏肖萍 李淑萍 毛亚飞 钊守凤
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌 LTB基因 霍乱弧菌 CTB基因 碱基序列 克隆,分子 LTB融合蛋白/免疫学 CTB融合蛋白/免疫学
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 17-20
• 页数: 4页
• 分类号: R378.2|R378.3|R392.2
• 字数: 2515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2003.01.005

摘要

目的:克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及霍乱弧菌肠毒素B亚单位(CTB)基因,构建其表达载体.方法:采用高保真PCR分别从E.coli 44815株与V.cholerae东74株基因组DNA中扩增LTB与CTB基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.分别构建pET32a的LTB及CTB表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE及GM1-ELISA鉴定表达产物.结果:所克隆的LTB和CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为99.12%～99.71%和98.54%～99.42%,氨基酸序列同源性分别高达97.58%～99.19%和96.77%～99.19%.pET32a-LTB-BL21DE3和pET32a-CTB-BL21DE3系统表达的融合蛋白产量分别占细菌总蛋白的30%和10%左右.GM1-ELISA结果证实LTB及CTB融合蛋白均能与牛GM1结合.结论:本研究成功地构建了LTB与CTB表达系统,所表达的LTB与CTB融合蛋白具有粘膜免疫佐剂活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
2	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
3	李淑萍	浙江大学医学院病原生物学教研室	16	109	6.0	10.0
4	钊守凤	浙江大学医学院病原生物学教研室	7	42	3.0	6.0
5	夏肖萍	浙江大学医学院病原生物学教研室	9	57	4.0	7.0