人CD34抗原胞外区cDNA的克隆、真核表达载体的构建及在基因免疫制备CD34单克隆抗体中的初步应用

• 作者: 刘楠 奚永志 孙玉英 崔建武 梁飞 王丽英
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗原,CD34 造血干/祖细胞 抗体,单克隆 真核表达载体 基因免疫
• 年，卷（期）: 2003,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1090-1092,1095
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 4000字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2003.12.015

摘要

目的克隆含编码人CD34抗原胞外区的cDNA,并构建其真核表达载体,探讨基因免疫制备抗人CD34单克隆抗体的可行性.方法从KG-1a细胞提取总RNA,RT-PCR扩增含编码人CD34抗原胞外区的cDNA并酶切测序鉴定,构建其真核表达载体pcDNA3.1-CD34.选取4～6周龄的BALB/c小鼠12只,随机分为3组,预先在股四头肌注射25%的蔗糖溶液50μl,然后在相同部位分别注射PBS空白对照、PBS稀释的空载体pcDNA3.1以及PBS稀释的pcDNA3.1-CD34,每2周1次共3次.免疫结束后定期FACS检测鼠尾静脉血抗人CD34抗体产生情况.结果所扩增的人CD34抗原胞外区cDNA全长886bp,扩增片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道完全一致,并且在5′端引入HindⅢ酶切位点,3′端引入EcoRI酶切位点及终止密码TGA.随后将其定向插入真核表达载体pCDNA3.1中,称之为pcDNA3.1-CD34,经阳性克隆筛选、酶切鉴定证实pcDNA3.1-CD34真核表达载体构建成功.FACS检测结果表明,用pcDNA3.1-CD34真核表达载体免疫的小鼠中仅1/4只在免疫结束后的第2～6周有较低滴度的CD34抗体产生,其余3只血清中均未检测到CD34抗体.结论成功地构建了人CD34抗原胞外区cDNA的真核表达载体pcDNA3.1-CD34,初步证明用其进行基因免疫制备CD34单克隆抗体是可行性的.