酵母双杂交检测C17orf25蛋白与ADP-核糖焦磷酸水解酶NUDT9的相互作用

• 作者: 张惠堂 杨胜利 胡小波 颜志强 龚毅
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: C17orf25 NUDT9 酵母双杂交 线粒体 ADP-核糖
• 年，卷（期）: 2003,（8）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 747-751
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

通过RACE PCR的方法从肝组织中分离得到C17orf25基因. 利用酵母双杂交的方法以C17orf25为结合结构域筛选人HeLa cDNA文库分离得到nudt9基因. NUDT9是一种焦磷酸酶, 可以将ADP-核糖水解成AMP和核糖-5-磷酸. 在大肠杆菌中直接表达了C17orf25蛋白、 6×His-tag与NUDT9的融合蛋白质, 两者均以包涵体形式存在. 蛋白质条带割胶纯化, 并复性. 之后的NTA-Ni2+亲和柱层析实验表明这两种蛋白质在体外相互作用. 将C17orf25与绿色荧光蛋白基因在SMMC7721中融合表达, 结果表明C17orf25蛋白可能定位在线粒体中, 侧面印证了在细胞内与NUDT9作用的空间可能性. ADP-核糖在体内具有重要的生理作用, 在细胞内的累积对细胞生长不利; 同时, ADP-核糖化是一种重要的蛋白质修饰方式, 与多种细胞凋亡的发生有关. 因此从实验结果可以判断, C17orf25对细胞生长的抑制作用可能通过与NUDT9的相互作用来实现.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨胜利	中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心	71	1074	15.0	31.0
2	胡小波	中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心	7	47	3.0	6.0
3	龚毅	中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心	35	288	11.0	16.0
4	张惠堂	中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心	6	3	1.0	1.0
5	颜志强	中国科学院上海生命科学研究院生物工程研究中心	6	68	3.0	6.0