小鼠着床丝氨酸蛋白酶2 cDNA的克隆、表达及抗体制备

• 作者: 余浩 左嘉客 杨增明 沈维雄 王健 申庆祥 黄哲平 黄萍
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: ISP2 PCR 基因表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2003,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 649-654
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 英文

摘要

以孕4.5天小鼠子宫着床位点总cDNA为模板,用PCR方法扩增获得着床丝氨酸蛋白酶2(ISP2)的cDNA. 序列分析表明, 该cDNA序列中的开放阅读框编码279个氨基酸, 并与文献报道完全相同, 但在3′非翻译区多204 bp, 已登录于GenBank(登录号: AF442819). 为了获得重组ISP2(rISP2), 构建了pGEX-4T-2/ISP2表达质粒, 进而在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白质GST-ISP2, 经SDS-PAGE回收的融合蛋白质用牛凝血酶酶切, 再经SDS-PAGE回收获得rISP2. 用rISP2作为免疫原免疫家兔获得ISP2多克隆抗血清. 用该抗血清进行免疫组化研究表明, ISP2在妊娠早期的小鼠子宫内膜腺上皮有特异性的高表达.