PCR法快速筛选重组克隆方法的改进

• 作者: 刘湘萍 司春祥 吕振华 孙道升 毛伟征 陈栋 隋爱华
• 来源期刊: 青岛大学医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组体筛选 聚合酶链反应 克隆,分子 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 普外科与肝胆血管外科专题
• 页码范围: 228-230
• 页数: 3页
• 分类号: Q784
• 字数: 2642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-4488.2003.03.004

摘要

①目的以PCR法在菌液中快速筛选重组克隆.②方法提取小鼠巨噬细胞总RNA,反转录PCR(RT-PCR)获得肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因片段,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌JM109.在大肠杆菌培养中的不同时间取样测定大肠杆菌A600值及计数.以不同数量的大肠杆菌为模板进行系列PCR扩增,获得适宜PCR扩增条件的大肠杆菌数.③结果以菌液为模板进行PCR能够快速筛选重组体,大肠杆菌模板数在125～250个范围内,PCR对阳性克隆的扩增可获得良好结果;获得常规培养条件下转化大肠杆菌的生长曲线,A600值与大肠杆菌计数间存在显著正相关(r=0.93,P<0.001).④结论通过测定大肠杆菌培养液A600值推算大肠杆菌数量,以适宜的大肠杆菌模板行PCR法筛选重组克隆,快速准确并方便下游操作.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	隋爱华	青岛大学医学院附属医院分子生物学中心实验室	92	345	10.0	12.0
2	吕振华	青岛大学医学院附属医院分子生物学中心实验室	33	114	7.0	9.0
3	陈栋	青岛大学医学院附属医院普外科	41	224	8.0	12.0
4	毛伟征	青岛大学医学院附属医院普外科	48	272	9.0	13.0
5	刘湘萍	青岛大学医学院附属医院分子生物学中心实验室	4	17	2.0	4.0
6	孙道升	青岛海慈医院检验科	1	0	0.0	0.0
7	司春祥	青岛海慈医院检验科	1	0	0.0	0.0