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摘要:
目的为了使液相杂交检测更加灵敏、特异、快速.方法通过改进杂交液的成分,选择最佳的探针浓度,使5′端标记生物素的PCR扩增产物与5′端标记地高辛的探针在PCR反应管中进行液相杂交,杂交条件为:94℃10 s冷却到37℃10 s即完成杂交.杂交后产物通过链霉亲和素被固定在微孔表面,同时在含高浓度DMSO的杂交液中将非特异结合的探针解离,然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测.结果液相杂交的条件优化:杂交液中二甲基亚砜(DMSO)浓度为300ml@L-1,探针浓度为0.5μmol@L-1,杂交温度为37℃.对60~600 bp的PCR产物的杂交特异性无明显差异,可以检测到1×104copy的PCR产物,对100例乙型肝炎患者的血清进行检测,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出HBV DNA阳性率为100%(30/30);HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清检出HBVDNA阳性率为78.6%(22/28);HBsAg(+)、抗HBc(+)的血清检出HBV DNA阳性率为66.7%(16/24),其余为阴性.结论该液相杂交法操作简单、快速、灵敏、特异,适合临床实验室使用.
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文献信息
篇名 PCR产物液相杂交检测的优化
来源期刊 现代检验医学杂志 学科 医学
关键词 PCR 液相杂交检测 优化
年,卷(期) 2003,(2) 所属期刊栏目 论著·实验技术
研究方向 页码范围 1-3
页数 3页 分类号 Q503|R512.6+2
字数 1452字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1671-7414.2003.02.001
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 郭晏海 第四军医大学全军基因诊断技术研究所 46 193 8.0 12.0
2 钟咏梅 福建省晋江医院检验科 3 11 2.0 3.0
传播情况
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研究主题发展历程
节点文献
PCR
液相杂交检测
优化
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
现代检验医学杂志
双月刊
1671-7414
61-1398/R
大16开
西安市友谊西路256号陕西省人民医院内
52-116
1986
chi
出版文献量(篇)
6791
总下载数(次)
18
总被引数(次)
21095
论文1v1指导