Ⅱ型登革病毒E基因的克隆及其酵母表达

• 作者: 方丹云 江丽芳 薛耀华 郭辉玉 魏惠永
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 E 基因 克隆 酵母菌 表达
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 31-33
• 页数: 3页
• 分类号: R373.3
• 字数: 2163字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2003.04.010

摘要

目的克隆2型登革病毒E基因并用酵母真核表达,获得全长的重组E蛋白,为其结构与功能的研究提供条件.方法从感染DEN2(NGC株)后病变的C6/36细胞上清中提取RNA,通过RT-PCR扩增E基因片段,与载体pPICZαB连接筛选得到重组质粒,电穿孔法将重组体整合入酵母菌P.pastoris,经抗生素Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌诱导表达,SDS-PAGE、免疫印迹检测表达产物.结果 RT-PCR得到1.5 kb的E基因片段,酶切鉴定与测序显示重组质粒含DEN2全长E基因;Mut+酵母转化菌可分泌表达约69 kDa的蛋白,与DEN2 E单抗的免疫印迹证实它为型特异的重组E蛋白.结论成功将克隆的全长DEN2 E基因在酵母菌中表达,获得的重组E蛋白具有免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方丹云	中山大学中山医学院微生物学教研室	35	121	6.0	8.0
2	江丽芳	中山大学中山医学院微生物学教研室	68	274	7.0	12.0
3	郭辉玉	中山大学中山医学院微生物学教研室	21	100	6.0	9.0
4	魏惠永		10	24	3.0	4.0
5	薛耀华	中山大学中山医学院微生物学教研室	2	1	1.0	1.0