p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测

• 作者: 代佳平 刘昕 刘琛 徐祥 梁华平 王正国 罗艳
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 核因子-κB p65 酵母双杂交 自身激活作用 酵母表达
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 123-126
• 页数: 4页
• 分类号: Q785|Q786|R379
• 字数: 3383字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2003.02.011

摘要

目的获得NF-κB p65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因,并检测靶基因的表达和自身激活活性.方法利用引物二聚体搭桥技术,扩增p65亚基DNA结合域基因片段,并将其克隆入酵母双杂交载体pGBKT7 DNA-BD.应用醋酸锂法转化酵母细胞AH109,在SD/-Trp选择培养基上培养,观察转化株的生长情况.按尿素/SDS法抽提酵母蛋白,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达.利用液相法和平板法检测阳性转化株β-半乳糖苷酶的活性.结果获得p65 DNA结合域基因片段,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因.靶基因能在酵母细胞中表达,对酵母细胞无毒性作用,无自身激活活性.结论 NF-κB p65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因,用于肽库筛选,捕捉与之相互作用的多肽.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐祥	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室	50	402	11.0	17.0
2	梁华平	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室	67	683	15.0	23.0
3	罗艳	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室	16	89	6.0	8.0
4	刘昕	第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室	39	295	9.0	15.0
5	刘琛	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室	3	12	3.0	3.0
6	代佳平	第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室	7	39	4.0	6.0