人心肌营养素-1重组腺病毒载体的构建、纯化及表达

• 作者: 廖维宏 张正丰 李红运 杨青峰
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌营养素-1 重组腺病毒 基因治疗
• 年，卷（期）: 2003,（17）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1531-1535
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1|R392.11|R394.2
• 字数: 4032字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2003.17.011

摘要

目的构建人心肌营养素-1重组腺病毒载体,以期用于神经系统退行性疾病及损伤的在体研究.方法构建穿梭质粒pDC316-huCT1和pDC316-eGFP,CsCl梯度离心制备高纯度的病毒基因组质粒pBHloxdeltaE1,3Cre、pHG140.培养293细胞,CaCl2法质粒共转染293细胞构建并筛选腺病毒AdCMV-huCT1和AdCMV-eGFP.病毒原液转染293细胞及NIH 3T3细胞,PCR、RT-PCR及免疫组化鉴定.CsCl梯度离心纯化病毒,空斑试验检测病毒滴度.纯化病毒注入大鼠颈脊髓,RT-PCR及免疫组化检验AdCMA-huCT的在体表达.结果采用双质粒共转染293细胞Cre/loxP位点同源重组方法构建了E1和E3缺失的含MCMV启动子、外源基因和SV40 PloyA的AdCMV-huCT1和AdCMV-eGFP载体.经过PCR、RT-PCR和免疫组化证实腺病毒载体构建成功.病毒经过CsCl梯度离心纯化后,AdCMV-huCT1滴度达到3.0×1010pfu.RT-PCR及免疫组化显示AdCMV-huCT1在大鼠脊髓中特异性表达.结论构建并纯化了体外及体内高效表达的AdCMV-huCT1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖维宏	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室	100	647	14.0	20.0
2	李红运	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室	4	30	3.0	4.0
3	张正丰	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室	102	2107	22.0	43.0
4	杨青峰	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室	2	20	2.0	2.0