极端嗜热菌海栖热袍菌α-葡萄糖醛酸酶的高效表达和重组酶的纯化

• 作者: 毛忠贵 薛业敏 邵蔚蓝
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 海栖热袍菌 α-葡萄糖醛酸酶 高效表达 重组酶纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 554-560
• 页数: 7页
• 分类号: Q814
• 字数: 6475字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.04.016

摘要

α-葡萄糖醛酸酶作为木聚糖降解的限速酶之一,在木聚糖类半纤维素的生物转化中起着重要的作用.海栖热袍菌Thermotoga maritima是一个嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的极耐热性酶类具有非常可观的工业应用前景.但热袍菌属Thermotoga的基因在大肠杆菌中的表达一般较困难.研究了T. maritima中的极耐热性α-葡萄糖醛酸酶基因在大肠杆菌不同菌株中的表达水平及纯化技术.结果表明,稀有密码子AGA、AGG和AUA限制了该基因在大肠杆菌中的表达,在大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL可得到高效表达,重组蛋白表达量达20%,比酶活比野生菌株提高5倍;重组蛋白经热处理和金属Ni2+的亲和层析提纯后,达到了电泳纯,提纯倍数为5.1倍,收率为55.1%.对重组菌诱导表达条件的研究表明,营养丰富的TB培养基有助于重组菌的生长, 重组菌生长至OD600为0.7～0.8时添加IPTG诱导5h后重组蛋白的表达量最高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵蔚蓝	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	54	772	16.0	25.0
3	毛忠贵	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	175	1381	18.0	29.0
6	薛业敏	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	14	254	10.0	14.0