应用实时荧光定量PCR测定AdEasy系统中重组腺病毒滴度

• 作者: 吕建新 彭颖 祝武强
• 来源期刊: 温州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 实时定量PCR 病毒滴度
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3
• 页数: 3页
• 分类号: R699.2|R373
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2138.2004.01.001

摘要

目的:确立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,对AdEasy系统中的重组腺病毒滴度进行测定.方法:采用Stratagene公司的AdEasyTM载体系统在293细胞中构建重组腺病毒,经10倍梯度稀释的病毒母液用以提取基因组DNA及空斑测定.以10倍梯度稀释的pAdEasy质粒作为标准模板进行实时PCR反应扩增六邻体基因片段,并绘制标准曲线.然后以上述的重组腺病毒DNA为模板,采用同样体系进行实时PCR反应,同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果:成功构建了重组腺病毒并对其进行了空斑测定.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线性范围为101～108拷贝.病毒母液的DNA拷贝浓度(vg/ml)值,约为空斑滴度(pfu/ml)值的10倍.结论:荧光实时定量PCR方法可在较大的线性范围内检测重组腺病毒滴度,较之空斑法更为准确地反映了重组腺病毒的实际数量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭颖	温州医学院细胞与分子医学研究所	29	167	7.0	12.0
2	吕建新	温州医学院细胞与分子医学研究所	153	1535	21.0	32.0