重组TFPI缺失突变体TFPI1-161在毕赤酵母中的高效表达及功能鉴定

• 作者: 孔德升 宋后燕 白浩 莫炜 郭泓坤 顾银良 马端
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 组织因子途径抑制物 TFPI1-161 表达 纯化 Pichiapastoris
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 生物制药
• 页码范围: 937-942
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4843字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.06.024

摘要

人组织因子途径抑制物(TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物.缺失突变体TFPI1-161仅包括TFPI的N末端、K1和K2结构域,是一种研究TFPI结构与功能及其相互关系的理想对照分子.以克隆质粒pGEM-3Zf(-)-TFPI为模板,用PCR方法获得TFPI1-161基因,构建表达质粒pPIC9K-TFPI1-161并转化毕赤酵母GS115.通过筛选多拷贝转化子及优化发酵培养条件,首次在毕赤酵母中高效表达了TFPI1-161,经纯化后最终产量高于酿酒酵母20倍以上.由于糖基化程度不同,TFPI1-161表达为TFPI1-161(24kD)和TFPI1-161(27kD)两种分子形式,其等电点分别为4.8和4.9.根据等电点差异,二者可通过阴离子交换层析得到分离,其活性无显著性差异.经分子筛和阴离子交换层析分离纯化后,从4L发酵培养液中可分别获得1.4g TFPI1-161(24kD)和1.8g TFPI1-161(27kD),其比活性分别达12 880u/mg和12 400u/mg,回收率达55%.经稀释的凝血酶原时间及发色底物法检测,重组TFPI1-161具有良好的抗凝及抑制FXa活性的作用.为获得大量TFPI1-161提供了一种廉价高效的蛋白表达纯化方式,为进一步的基础及临床前研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋后燕	复旦大学分子医学教育部重点实验室	94	467	12.0	17.0
2	马端	复旦大学分子医学教育部重点实验室	52	328	10.0	16.0
3	顾银良	复旦大学分子医学教育部重点实验室	4	11	3.0	3.0
4	孔德升	复旦大学分子医学教育部重点实验室	4	6	2.0	2.0
5	莫炜	复旦大学分子医学教育部重点实验室	22	92	6.0	9.0
6	白浩	复旦大学分子医学教育部重点实验室	3	11	2.0	3.0
7	郭泓坤	复旦大学分子医学教育部重点实验室	3	6	2.0	2.0