猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化

• 作者: 孙美榕 张红莲 张锐 杜慧 杨捷 欧阳红生 陈绍红 黄燕
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报(自然科学版)
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肌生成抑制素基因 成熟蛋白编码序列 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2004,（9）
• 页码范围: 53-56
• 页数: 4页
• 分类号: Q786|S828.2
• 字数: 2602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-9387.2004.09.012

摘要

猪肌生成抑制素基因myostatin (MSTN)的cDNA在去除信号肽后,对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2 kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆,并测序分析,结果表明其与设计序列完全一致.将该克隆载体的质粒DNA用带有BamHⅠ和SalⅠ内切酶识别序列的另1对引物进行PCR扩增,将回收的1.2 kb PCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体.对成功构建的表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的;SDS-PAGE凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,表达的MSTN分子质量为41.451 3 ku.因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,用His-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92.5%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张红莲	湛江海洋大学现代生化中心	14	189	6.0	13.0
2	张锐	湛江海洋大学现代生化中心	19	189	7.0	13.0
3	孙美榕		10	94	4.0	9.0
4	杨捷	湛江海洋大学现代生化中心	5	44	3.0	5.0
5	黄燕	湛江海洋大学现代生化中心	9	127	5.0	9.0
6	陈绍红	湛江海洋大学现代生化中心	20	268	10.0	16.0
7	杜慧	湛江海洋大学现代生化中心	5	45	3.0	5.0