鸡γ-干扰素基因在昆虫细胞/杆状病毒载体系统中的表达

• 作者: 刘胜旺 孔宪刚 王海艳 赵振华
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡IFN-γ 昆虫细胞/杆状病毒 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 639-643
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 3978字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2004.06.005

摘要

将鸡(Gallusgallus)的γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB的BamHⅠ位点上,构建真核转移载体pMelBacB-ChIFN-γ,经限制性内切酶消化、ChIFN-γ特异引物PCR鉴定和序列测定,证明目的基因正确克隆到载体的预期位点.将纯化的pMelBacB-ChIFN-γ质粒与杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染sf9昆虫细胞,经3轮蓝斑筛选纯化,获得了重组杆状病毒rBaculovirus-ChIFN-γ.提取病毒DNA经ChIFN-γ特异引物和重组杆状病毒特异引物PCR鉴定,证明获得了纯化的重组杆状病毒,命名为rBaculovirus-ChIFN-γ.用该重组病毒接种sf9昆虫细胞,收获接种后不同时间的细胞进行SDS-PAGE,结果表明ChIFN-γ基因在昆虫细胞中获得了表达,表达的重组蛋白分子量约为19 kD.应用在大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统中表达的重组蛋白制备的兔抗ChIFN-γ多克隆抗体进行Westernblot分析,表明表达的重组蛋白具有抗原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘胜旺	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	53	724	15.0	25.0
2	孔宪刚	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	49	711	13.0	25.0
3	赵振华	内蒙古农业大学动物科学与医学学院	34	407	11.0	19.0
4	王海艳	内蒙古农业大学动物科学与医学学院	2	5	1.0	2.0