VEGF受体结合抑制肽的筛选及其特性鉴定

• 作者: 向军俭 向征 杨红宇 钟振东 黄竞荷
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体随机展示肽库 血管内皮细胞生长因子 抗原表位 合成肽 疫苗
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 462-466
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4681字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.06.013

摘要

目的筛选能抑制VEGF与血管内皮细胞表面受体结合的VEGF模拟短肽,探讨小分子短肽作为血管内皮细胞生长抑制剂、肿瘤疫苗的可行性. 方法以抗-VEGF单克隆抗体分别对噬菌体随机7肽、12肽库进行筛选.通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定.用噬菌体克隆免疫小鼠检验这种短肽可否模拟VEGF的抗原决定簇诱发机体产生能与VEGF结合的抗体,研究小鼠抗血清、噬菌体表达的7肽和12肽以及人工合成7肽对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)生长的抑制作用. 结果对肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100%,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列:GWYYDAL、VASAVFYSALVE.这两种噬菌体短肽免疫小鼠能激发产生高效价的抗-VEGF抗体.噬菌体表达的7肽和12肽对HUVEC的生长有明显的抑制作用.由短肽GWYYDAL阳性克隆免疫的抗血清对VEGF诱导的内皮细胞生长起抑制作用,人工合成的7肽(GWYYDAL)呈剂量依赖性阻拮VEGF促HUVEC增殖作用. 结论从噬菌体肽库中筛选到的噬菌体短肽GWYYDAL、VASAVFYSALVE模拟了VEGF的抗原表位,为研究VEGF受体结合抑制肽和设计肿瘤疫苗奠定了实验基础.