一个可能的与人端粒结合因子相互作用蛋白Tara的分离和克隆

• 作者: 余建 孙洁 施继敏 朱园园 李静远 来晓瑜 林茂芳 罗依 蓝建平 黄河
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒 蛋白质类/分析 端粒结合因子 基因,Tara 免疫共沉淀 质谱
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 486-490
• 页数: 5页
• 分类号: R394.3
• 字数: 3848字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2004.06.004

摘要

目的:分离和鉴定端粒结合因子(TRF1)免疫共沉淀蛋白复合物并克隆其基因.方法:以TRF1抗体应用免疫共沉淀方法,从细胞蛋白抽提物中分离TRF1蛋白复合物,并作蛋白质肽指纹谱鉴定;应用温度梯度PCR,从人cDNA文库中扩增目的基因,并构建pEGFP-C2真核表达载体;核苷酸测序和Western blot验证目的基因序列和表达载体.结果:从TRF1免疫沉淀复合物中分离出了Tara蛋白;人cDNA文库中PCR扩增所得产物为1.7 kb,与Tara基因CDS序列同源性为99.9%;GFP/Tara融合蛋白约100 kD,Tara在间期HeLa细胞中弥散表达于胞浆,而有丝分裂细胞则定位于整个细胞.结论:Tara是一个可能的TRF1相互作用蛋白,其作用机制需进一步实验研究.