结球甘蓝雌蕊发育调控因子SPT与HEC1的基因克隆及相互作用

• 作者: 刘智宇 孙梓健 宋明 杨朴丽 汤青林 王小佳 王志敏 许俊强
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 结球甘蓝 雌蕊 SPT HEC1 相互作用 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1011-1019
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2014.01011

摘要

为研究SPT和HEC及其相互作用对甘蓝雌蕊发育的影响,以结球甘蓝自交不亲和系E1为材料,提取雌蕊总RNA,根据拟南芥中SPT和HEC1基因设计引物,采用同源克隆方法克隆SPT基因,其序列1085 bp,开放阅读框(ORF) 1062 bp; HEC1基因ORF 696 bp.通过cDNA推导得到的氨基酸序列表明,SPT编码353个氨基酸残基,预测分子量为37.67kD,pI为6.83; HEC1编码231个氨基酸残基,预测分子量为25.26 kD,pI为10.2.两基因在各器官中均表达,但SPT在果实和雌蕊中表达量最高,而HEC1在根和花蕾中的表达量最高.为检测两者的相互作用,构建原核表达质粒pCold I-SPT和pGEX-HEC1,pull-down试验表明两蛋白能够在体外相互作用.同时构建pGBKT7-SPT、pGADT7-HEC1及互换载体pGBKT7-HEC1和pGADT7-SPT酵母表达载体,分别转化酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后均未出现自激活和毒性现象,融合后的二倍体酵母均能在S D/-Trp-Leu-Ade-His/X-t-gal/AbA板上长出蓝色菌斑,表明SPT和HEC1能够相互作用激活下游的HIS3、AUR1-C、MEL1和ADE2报告基因,酵母双杂交试验结果与Pull-down检测一致,说明SPT和HEC1能够相互作用以调控雌蕊的发育.