结球甘蓝雌蕊调控转录因子SPT基因的克隆与序列分析

• 作者: 刘智宇 宋明 张丹华 杨朴丽 汤青林 王志敏 许俊强
• 来源期刊: 中国蔬菜
• 学科: 农学
• 关键词: 结球甘蓝 雌蕊 SPT 基因克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2013,（20）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 24-31
• 页数: 8页
• 分类号: S635.1
• 字数: 4783字
• 语种: 中文

摘要

以结球甘蓝E1为材料，提取花蕾总RNA，反转录cDNA。根据拟南芥SPT基因设计引物，采用同源克隆的方法从中克隆SPT基因序列1085 bp，开放阅读框1062 bp。通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明，BoSPT编码353个氨基酸残基，预测分子量为37.67 kD，pI为6.83。经过EcoRⅠ和KpnⅠ限制酶双酶切后，构建原核表达质粒pET43.1a-BoSPT转化表达菌株E. coli Rosetta（DE3），通过SDS-PAGE 检测该蛋白的表达。经Smart-embl预测其具有bHLH家族结构域，位于序列第173～221位氨基酸残基处。进化树表明结球甘蓝BoSPT与拟南芥AtSPT和筷子芥AlSPT的亲缘关系较近。BoSPT基因的原核表达得到纯化的融合蛋白。