小鼠骨保护素配基胞外片段的表达、纯化及生物活性分析

• 作者: 张镜宇 梁东春 王宝利 邱明才 郭刚
• 来源期刊: 遗传学报
• 学科: 医学
• 关键词: 骨保护素配基 表达 纯化 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2004,（7）
• 所属期刊栏目: 动物遗传学
• 页码范围: 675-681
• 页数: 7页
• 分类号: R589.5
• 字数: 176字
• 语种: 中文

摘要

骨保护素配基(OPGL)是调节破骨细胞分化和成熟的核心细胞因子.由小鼠骨组织提取总RNA,RT-PCR扩增得到小鼠OPGL胞外片段(sOPGL) cDNA,以特定策略克隆入表达载体pET-42a(+),以便使未来表达产物的融合标签序列能够完全被因子Xa切除.重组载体在大肠杆菌中诱导表达可获得高水平的47 kD产物,Western blotting证实它可被OPGL抗体识别.经Glutathione-sepharose 4B亲和层析,除融合蛋白外,还有一约30 kD蛋白与层析柱发生了特异性亲和.该30 kD蛋白可被GST-IGF-I多克隆抗体识别,但不能被OPGL抗体识别,提示它的产生乃由于融合蛋白在融合位点附近发生裂解.融合蛋白经Xa因子裂解和进一步纯化,得到分子量约17.5 kD的sOPGL.生物活性分析证明,重组sOPGL可以促进OLC的生成,并呈现剂量依赖关系.