刺参甘露糖结合凝集素的原核表达、纯化及生物活性分析

• 作者: 丁文勇 刘洋 张永攀 徐文琦 李丹彤 王秀利 谢广成
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 刺参 甘露糖结合凝集素 原核表达 蛋白纯化 红细胞凝集试验
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 页码范围: 1166-1171
• 分类号: Q786|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2011.17315

摘要

为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性.采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET-AJ-MBL.重组质粒转化大肠杆菌BL21( DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达出分子量约17 ku的融合蛋白.该蛋白以包涵体形式存在,用Ni2+离子亲和柱纯化.结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白.纯化的17 ku AJ-MBL进行红细胞凝集试验检测其生物学活性.凝集试验结果显示,AJ-MBL凝集最小浓度为10μg/mL.本实验成功构建了AJ-MBL原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了17 ku AJ-MBL蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性.