人BDNF的克隆、表达及其活性检测

• 作者: 孙朝晖 左皓 李鹏 谢佐平 赖燕来
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脑源性神经营养因子 原核表达 星形胶质细胞 多巴胺神经元
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 543-547
• 页数: 5页
• 分类号: R33
• 字数: 2762字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7547.2004.06.001

摘要

为了研究脑源性神经营养因子在大肠杆菌中的表达及其在治疗Parkinson病中的作用,采用RT-PCR技术,从人胚脑组织扩增及克隆了BDNF全长及其成熟蛋白编码基因,经测序证实后,将其分别克隆至表达载体pcDNA3.1与pGEX6p-1,构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-BDNF和重组原核表达载体pGEX6p-BDNFs.pcDNA3.1-BDNF经脂质体介导转染至体外培养的E16胚鼠中脑星形胶质细胞,以G418筛选出抗性阳性克隆,该克隆株与E12-E14胚鼠中脑神经干细胞体外共培养,酪氨酸羟化酶免疫细胞化学反应显示,转染细胞株所表达的BDNF蛋白具有生物学活性,可延长前体细胞的存活并促进其向多巴胺神经元分化.将pGEX6p-BDNFs转化大肠杆菌,以IPTG诱导,获得了相对分子质量约为40 kD的GST-BDNF融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的10%,并经免疫印迹证实具有特异的免疫反应性.