人骨形成蛋白-2基因腺病毒表达载体构建方法的优化

• 作者: 冯进波 刘少华 孙善珍 曲迅 杨美香 王磊 魏奉才
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 骨形成蛋白-2 基因重组 体外连接技术
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 138-141
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|R730.59
• 字数: 3165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2004.02.014

摘要

目的:探索采用体外连接技术替代同源重组方法构建Ad-BMP-2,优化腺病毒载体构建方法.方法:将BMP-2基因连接到辅助载体pShuttle2后,以限制性内切酶PI-Sce Ⅰ及Ⅰ-Ceu Ⅰ酶切,获得含启动子Pcmvie的BMP-2基因片段,然后将其连接到经同样双酶切的Adeno-X载体上,获得含BMP-2基因的重组腺病毒载体Ad-BMP-2.将其以限制性内切酶Pac Ⅰ酶切线性化后,转染HEK293细胞,包装重组腺病毒颗粒,并采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定.结果:重组载体pShuttle2-BMP-2及Adneo-BMP-2均采用酶法切及PCR鉴定,鉴定结果均与理论相符.将包装后的重组腺病毒以PCR鉴定,以1%琼脂糖电泳见1.2 kb及287 bP有带,与MBP-2及腺病毒扩增片段大小相符.结论:与传统的同源重组方法相比,体外连接技术方法简单、快捷,并且此方法不需噬斑纯化、筛选方法简便,提高了腺病毒载体构建的效率;同时,Ad-BMP-2的构建成功为后续进行BMP-2基因的治疗研究奠定了坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏奉才	山东大学齐鲁医院口腔科	90	392	10.0	13.0
2	孙善珍	山东大学口腔医学院	69	325	9.0	12.0
3	刘少华	山东大学齐鲁医院口腔科	50	191	8.0	11.0
4	王磊	山东大学口腔医学院	268	1703	20.0	30.0
5	冯进波	山东大学齐鲁医院临床基础研究所	33	185	8.0	11.0
6	杨美香	山东大学齐鲁医院临床基础研究所	32	143	6.0	10.0
7	曲迅	山东大学齐鲁医院临床基础研究所	95	471	12.0	15.0