骨形成蛋白9腺病毒表达载体的构建及鉴定

• 作者: 张青蓝 方芳 朱丹平 杨孛 鄢国义
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨形成蛋白质类 腺病毒科 糖尿病,2型
• 年，卷（期）: 2015,（17）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 2318-2319,2323
• 页数: 3页
• 分类号: Q781
• 字数: 2108字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2015.17.005

摘要

目的 构建骨形态发生蛋白9 (BMP9)基因腺病毒表达载体及稳定产毒细胞系,为观察其对T2DM糖、脂代谢异常的干预效应奠定基础.方法 质粒pCMV/BMP9双酶切克隆至腺病毒载体Ad5.F,构建重组腺病毒表达载体Ad5.BMP9.F,酶切测序鉴定;转包装细胞,经抗性筛选检测病毒滴度,挑选滴度较高的稳定产毒细胞克隆进行逆转录PCR(RT-PCR)鉴定.结果 建立BMP9基因腺病毒表达载体Ad5.BMP9.F经酶切及测序证实目的基因插入位点及读码框架正确;建立稳定产毒细胞克隆最高病毒滴度达7.4×105 CFU/mL,RT-PCR证实BMP9基因整合其中并稳定表达.结论 成功构建含BMP9基因的腺病毒表达载体及其稳定产毒细胞系.