重组人淋巴毒素α缺失体的表达、纯化及鉴定

• 作者: 刘永全 刘金毅 李道锋 牛晓霞
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: rhLT-α 表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 109-112
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3353字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2004.01.033

摘要

目的:构建重组人淋巴毒素α缺失体(rhLT-αΔN27)的原核表达载体, 在大肠杆菌中进行表达, 建立纯化rhLT-αΔN27的工艺.方法:从Jurkat细胞中提取总RNA, 用RT-PCR扩增rhLT-αΔN27基因, 并插入原核表达载体pET-23b中, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 用IPTG诱导rhLT-αΔN27表达.包涵体经洗涤和复性后, 用DEAE Sepharose FF和Phenyl-Sepharose FF纯化.结果:rhLT-αΔN27以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后, rhLT-αΔN27的纯度达99%, 比活性高于8×107 U/mg.纯化样品的相对分子质量(Mr)、等电点, 以及N端序列等其他理化性质均同预计的结果相符.结论:构建了rhLT-αΔN27的表达载体, 并成功地在大肠杆菌中进行了表达, 建立了rhLT-αΔN27的纯化工艺.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘金毅		22	98	5.0	9.0
2	牛晓霞		10	24	4.0	4.0
3	刘永全		1	5	1.0	1.0
4	李道锋		1	5	1.0	1.0