牙龈卟啉单胞菌菌毛相关外膜蛋白pgmA基因的克隆和表达

• 作者: 严杰 孙伟莲 庄春燕 陈莉丽
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 牙龈卟啉单胞菌 基因,pgmA 克隆,分子 PgmA融合蛋白/免疫学
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 41-45
• 页数: 5页
• 分类号: R392.5
• 字数: 2494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2004.01.010

摘要

目的:克隆牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)pgmA基因,构建pgmA基因表达载体,鉴定其表达产物的免疫性.方法:采用高保真PCR分别从牙龈卟啉菌ATCC 33277和47A-1菌株中扩增pgmA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET32a的pgmA表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达,采用兔抗融合蛋白血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性,采用ELISA 检测65株临床分离牙龈卟啉单胞菌与PgmA融合蛋白抗血清的反应情况.结果:所克隆的牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277与47A-1菌株pgmA基因的核苷酸序列同源性为100%,与报道的相应核苷酸序列同源性为98.98%,氨基酸序列同源性高达99.18%.pET32a-pgmA-BL21DE3系统的PgmA融合蛋白表达量为细菌总蛋白的50%左右.PgmA融合蛋白免疫家兔能获得相应抗体并与PgmA蛋白发生结合反应.ELISA结果证实92.3%的牙龈卟啉菌临床菌株(60/65)能与PgmA融合蛋白抗血清发生结合反应.结论:本研究成功地构建了Pg pgmA高效表达系统,所表达的PgmA融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性,可作为Pg检测试剂盒和Pg疫苗的候选抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
2	陈莉丽	浙江大学医学院附属第二医院口腔科	57	305	10.0	14.0
3	孙伟莲	浙江大学医学院附属第二医院口腔科	23	75	5.0	7.0
4	庄春燕	浙江大学医学院附属第二医院口腔科	1	5	1.0	1.0