牛蛙核糖核酸酶基因原核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘彦仿 张静梅 王付勇 苏勤 赵君
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 牛蛙核糖核酸酶 大肠杆菌 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: Q522
• 字数: 3170字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-8199.2004.01.002

摘要

目的:克隆牛蛙核糖核酸酶(RC-RNase)基因,构建重组原核表达载体,利用大肠杆菌系统表达RC-RNase蛋白. 方法:采用RT-PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆RC-RNase基因,并进行序列测定;将RC-RNase基因插入到6×His表达载体pRSET-A中,构建成表达质粒pRSET-RC-RNase,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定. 结果:扩增出一条约380 bp的基因片段,双酶切鉴定和序列测定的数据与预期结果一致.经IPTG诱导,融合蛋白 (His)6- RC-RNase在大肠杆菌中得到成功表达,SDS-PAGE上出现相对分子质量约为16 000的一条新生蛋白带,经蛋白印迹验证为表达蛋白.薄层扫描显示,表达产物占菌体总蛋白的12.5%,主要以包涵体形式存在. 结论:正确克隆出RC-RNase基因,并在大肠杆菌中得到成功诱导表达,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘彦仿	第四军医大学病理学教研室	110	509	12.0	15.0
2	赵君	第四军医大学病理学教研室	24	100	7.0	8.0
3	苏勤	第四军医大学病理学教研室	27	166	8.0	12.0
5	王付勇	第四军医大学病理学教研室	1	3	1.0	1.0
8	张静梅	第四军医大学病理学教研室	2	6	2.0	2.0