可溶型人干细胞因子cDNA的克隆表达、复性与纯化

• 作者: 王骊丽 耿信笃 韩骅
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: PCR 人干细胞因子 大肠杆菌包含体 高效疏水色谱 色谱饼 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 402-405
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 3847字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2004.04.005

摘要

目的:构建可溶型人干细胞因子(hSCF)基因的表达载体.优化培养条件,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达.方法:利用PCR技术,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因.用简并PCR对hSCF基因5′端的序列进行修饰,以实现在大肠杆菌中的高效表达;用MTY比色法测定初步复性和纯化的hSCF蛋白的生物学活性.结果:扩增并克隆了hSCF成熟肽cDNA.将其插入表达载体pBV220构建了hSCF基因的表达质粒,并在大肠菌中初步表达.表达量占总菌体的20%以上,优化培养条件后表达量可达到40%以上,表达产物为包涵体.将包涵体溶解在8 mol/L脲或7 mol/L盐酸胍中,用疏水色谱法进行复性并同时纯化,得到具有天然生物学活性的rhSCF蛋白.结论:成功地克隆hSCF基因,并实现在原核系统中的高表达,所获表达菌株可用于生产以获得具有生物学活性的rhSCF蛋白产品.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩骅	第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室	118	472	11.0	13.0
2	耿信笃	西北大学现代分离科学研究所	80	808	14.0	26.0
3	王骊丽	西北大学现代分离科学研究所	13	63	6.0	7.0