新型CHO/dhfr-细胞定点整合和表达系统的建立

• 作者: 俞炜源 刘志刚 徐桂清 林建波 许凌峰
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: CHO/dhfr-细胞 flp-FRT重组系统 定点整合 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 501-504
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 4442字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2004.06.001

摘要

目的:建立CHO/dhfr-细胞的定点整合和表达系统.方法:利用常规分子生物学方法,构建了一个新的高效筛选表达载体,该载体含有一个由FRT(flp recombination target)位点、报告基因(LacZ)及筛选基因(zeocin)三片段构成的融合基因,而且该基因的表达受一个弱化的SV40启动子的控制.借助于随机整合及高效筛选,实现FRT位点在CHO/dhfr-细胞基因组中转录活跃区的整合,然后利用该位点介导的特异性重组实现了目的基因(单链抗体-尿激酶融合基因)的定点整合和有效表达,而且随后通过DHFR/MTX系统的加压扩增,以提高单链抗体-尿激酶融合基因在宿主细胞中的表达水平.结果与结论:获得了能够实现外源基因在基因组中定点整合和有效表达的CHO/dhfr-细胞系,并利用该细胞系实现了单链抗体-尿激酶融合基因的高表达,表达量达到5 μg/(106细胞·24 h).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	俞炜源	军事医学科学院生物工程研究所	87	518	11.0	17.0
2	林建波	军事医学科学院生物工程研究所	18	66	6.0	7.0
3	刘志刚	军事医学科学院生物工程研究所	21	138	7.0	10.0
4	许凌峰	军事医学科学院生物工程研究所	3	31	2.0	3.0
5	徐桂清	军事医学科学院生物工程研究所	3	13	2.0	3.0