重组人蛋白C在CHO/dhfr+细胞中的表达与分析

• 作者: 卜凤荣 张亚东 陈琳
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白质C 基因表达 重组蛋白质量 抗体,单克隆
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 102-104,108
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2225字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2002.02.007

摘要

目的:人蛋白C具有重要的抗凝功能,与复发性血栓性疾病、蛋白C缺陷症、创伤等有重要关系.血源蛋白C成本高、工艺复杂且存在纯度、稳定性、安全性等问题,研制重组人蛋白C具有必要性.目前尚无此类产品上市.本研究拟从人肝细胞中克隆蛋白C的cDNA,构建人蛋白C的哺乳动物细胞表达载体,实现重组人蛋白C在CHO/dhfr+中的表达.方法: 用RT_PCR从人胎肝细胞mRNA中扩增人蛋白C的全长cDNA片段,将之克隆入pGEM_T载体并测序.目的片段插入真核表达载体pIRESneo以构建重组表达质粒.磷酸钙共沉淀法转染CHO/dhfr+细胞,G418筛选抗性克隆.Western 印迹法检测细胞培养上清.Hitrap Q进行色谱纯化.表达产物经蛙蛇蛇毒激活后以APTT法测定抗凝活性.结果:RT_PCR扩增到长1*!386*!bp的DNA片段,序列与已报道的人蛋白C一致.所构建的表达质粒pIREShPC转染CHO/dhfr+细胞,经G418加压筛选得到7株表达细胞.Western印迹法检测发现表达产物能与抗人蛋白C单克隆抗体结合,相对分子质量与人蛋白C一致.Hitrap Q纯化重组蛋白回收率＞60%.表达产物抗凝活性略低于天然人蛋白C.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卜凤荣	军事医学科学院输血医学研究所	30	204	8.0	13.0
2	陈琳	军事医学科学院输血医学研究所	29	199	7.0	13.0
3	张亚东	军事医学科学院输血医学研究所	9	41	3.0	6.0