重组人α-半乳糖苷酶A在CHO细胞中的表达及鉴定

• 作者: 季守平 李素波 檀英霞 王颖丽 让文亮 高红伟
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 人α-半乳糖苷酶 法布莱病 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 54-57
• 分类号: Q754
• 字数: 3655字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.01.013

摘要

目的 构建重组人α-半乳糖苷酶A(GLA)真核表达载体,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达重组的人GLA.方法 利用RT-PCR方法从人肝癌细胞中克隆人GLA cDNA,并构建到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A中.将重组质粒转染CHO细胞并用G418筛选.用丁酸钠诱导G418抗性细胞,检测培养上清中的GLA活性,筛选高表达GLA的细胞株.采用HisTrapTM FF纯化培养上清中的GLA蛋白并利用Western 印迹进行鉴定.结果 成功构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A-GLA,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达,得到高表达量的单克隆(蛋白比活为1935 U/mg).纯化后的培养上清在50×103(Mr)附近出现单一条带,通过Western 印迹确定为GLA蛋白.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/myc-His A-GLA,获得了具有生物活性的重组人GLA,为临床上治疗法布莱病奠定了一定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王颖丽		4	7	1.0	2.0
2	檀英霞		3	7	1.0	2.0
3	季守平		3	1	1.0	1.0
4	让文亮		2	1	1.0	1.0
5	高红伟		2	1	1.0	1.0
6	李素波		2	1	1.0	1.0