基于CHO细胞定点整合技术的新型抗体呈现系统的构建

• 作者: 何阳阳 刘志刚 刘敏 孙志伟 庞晓斌 张畅 李春 王双
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 抗体库 CHO细胞 展示系统 高通量筛选 抗VEGF特异性抗体
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 608-612,625
• 分类号: R392.11|Q2
• 字数: 5082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2012.08.014

摘要

目的 建立一个以CHO定点整合系统为基础的高通量抗体筛选平台,筛选获得抗VEGF高亲和力突变体抗体.方法 设计并构建了基于CHO细胞定点整合系统的通用minibody展示载体,将3株亲和力已知的抗VEGF抗体(A6,A63,A657)和1个抗VEGF轻链抗体库分别呈现在CHO细胞的表面,通过Western印迹、Bia-core3000、流式细胞分析等对该展示系统进行验证和评价,并通过流式细胞分选技术对抗体库进行了细胞筛选.结果 成功实现了抗VEGF抗体在CHO细胞表面的展示,流式细胞分析抗体的亲和力与Biacore测定全抗体亲和力结果一致;通过筛选获得3株抗VEGF高亲和力突变体抗体.结论 建立了基于CHO定点整合技术的新型抗体库展示系统,为抗体的亲和力成熟、分子改造等突变库的构建和筛选提供了新的技术支持.