粉尘螨Ⅰ类抗原cDNA的克隆表达和初步鉴定

• 作者: 李朝品 杨庆贵
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粉尘螨 抗原 cDNA 基因重组 原核表达
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 472-474
• 页数: 3页
• 分类号: R384.4
• 字数: 2322字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2004.06.018

摘要

目的构建粉尘螨Ⅰ类抗原(Der f1 )cDNA基因的重组表达质粒,并于E.coli表达.方法用BamHⅠ和SacⅠ从重组质粒pMD-18T-Der f1上切下Der f1基因,插入表达载体pET32a(+)质粒,转化大肠杆菌BL21,在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重组子,并经双酶切及PCR扩增鉴定.重组质粒pET32a(+)-Der f1转化大肠杆菌,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和薄层凝胶扫描定量分析.结果对重组质粒进行酶切和PCR鉴定,与预期结果相符,证明已成功构建携带Der f1基因的重组原核表达质粒pET32a(+)-Der f1.核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pET32a(+)-Der f1中所含的Der f1基因与GenBank中的Der f1序列同源性达到99.5%.Der f1基因在大肠杆菌诱导表达后获得Mr约45 000的蛋白,蛋白含量占全菌体蛋白含量的15%.结论成功构建了粉尘螨Ⅰ类抗原cDNA基因的重组表达质粒pET32a(+)-Der f1,并在大肠杆菌中获得高效表达,为获得重组纯化Der f1变应原并用于尘螨变应性疾病的诊治奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李朝品	安徽理工大学医学院病原学与免疫学教研室	241	1563	18.0	28.0
2	杨庆贵	安徽理工大学医学院病原学与免疫学教研室	28	261	10.0	14.0