猪肌生成抑制素基因成熟蛋白编码序列的表达与纯化

• 作者: 孙美榕 张玉静 张锐 欧阳红生
• 来源期刊: 云南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肌生成抑制素基因 成熟蛋白编码序列 表达与纯化
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术·遗传育种·种质资源
• 页码范围: 255-259
• 页数: 5页
• 分类号: S828.2
• 字数: 2949字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-390X.2004.03.004

摘要

猪肌生成抑制素基因myostatin(MSTN)的cDNA去除信号肽后对成熟蛋白编码序列PCR扩增出1.2kb片段,将该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109受体菌细胞,筛选阳性克隆测序分析,结果表明与设计序列完全一致.将该克隆载体的质粒DNA用带有BamH I和Sal I内切酶识别序列的另一对引物进行PCR扩增,将回收的1.2kb PCR目的片段定向克隆到pET28a(+)表达载体上,成功地构建了猪肌生成抑制素成熟蛋白编码的原核表达载体.对成功构建表达载体阳性克隆在LB液体培养基中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳显示,重组菌表达的MSTN蛋白是以包涵体的形式表达的;SDS-PAGE凝胶经薄层扫描仪扫描分析,表达的MSTN包涵体蛋白占菌体不溶性蛋白含量的27.9%,表达的MSTN分子量为41 451.3D.因为所构建的表达载体中含六聚组氨酸标签,则用His-trap亲和柱进行纯化后,纯度可达92.5%.该试验为获得较好的猪肌生成抑制素基因抗原、制备抗体打下了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玉静	中国人民解放军军需大学生物化学与分子生物学教研室	21	133	5.0	11.0
2	张锐	湛江海洋大学现代生化中心	19	189	7.0	13.0
3	欧阳红生	中国人民解放军军需大学生物化学与分子生物学教研室	10	102	5.0	10.0
4	孙美榕		10	94	4.0	9.0