多价抗人精浆蛋白/抗人CD3双特异性单链抗体的构建及表达

• 作者: 于磊 武国军 王智 王栋 王禾 白玉杰 袁建林 郝晓柯
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺肿瘤 基因 克隆
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 529-532
• 页数: 4页
• 分类号: R6
• 字数: 3113字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1000-6702.2004.08.006

摘要

目的构建多价抗人精浆蛋白(γ-Sm)/抗人CD3双特异性单链抗体(scFv)基因,并进行真核表达和活性测定.方法利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四聚功能域融合基因,克隆入pUC19载体中构建pUC19/IgG3/p53克隆载体.将抗人CD3scFv(CD3scFv)和抗人γ-Sm scFv(γ-Sm scFv)依次克隆入pUC19/IgG3/p53载体中,构建多价双特异性γ-Sm scFv/CD3scFv[scFv2(CD3/γ-Sm)]融合基因.将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2-B中,转染HeLa细胞进行表达,表达产物纯化后流式细胞仪进行活性测定.结果获得了多价scFv2(CD3/γ-Sm)融合基因,基因全长1638 bp,可编码546个氨基酸,与已发表的γ-Sm scFv、CD3scFv和人p53四聚功能域基因cDNA序列一致.表达产物经sDS-PAGE和Western印迹实验证实为约67 000的特异蛋白条带,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC-3细胞和人外周血单个核细胞(PBMC),亲和力高于双特异性scFv.结论获得了可与PBMC和PC-3细胞特异结合的多价scFv2(CD3/γ-sm),为进一步临床应用提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王栋		3	7	2.0	2.0
2	王智	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	21	51	5.0	6.0
3	白玉杰	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	26	150	6.0	11.0