小鼠IL-12单链融合基因真核表达质粒构建及其肿瘤基因治疗初探

• 作者: 佟慧 姜少灏 张红中 李全海 杨丽娟 王丽 王平 王润田 王蕙芬
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-12 基因克隆 融合基因 真核表达 小鼠
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 免疫治疗
• 页码范围: 137-141
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 5162字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.02.020

摘要

目的构建小鼠IL-12单链融合基因(msIL-12),进行基因治疗初探. 方法用RT-PCR法从小鼠腹腔巨噬细胞总RNA分别获取p40cDNA和p35cDNA,2次PCR引入linker后,依次克隆入pcDNA3质粒,构建成msIL-12真核表达质粒(pmsIL-12);用DEAE-dextran法将PEG纯化的pmsIL-12转染COS-7细胞,用ELISA法检测其培养上清(转染上清)IL-12蛋白含量.皮内注射PEG纯化的pmsIL-12,用MTT法检测其对正常小鼠脾细胞NK活性的影响,观察其对荷H22腹水型肝癌细胞瘤小鼠生存期的影响. 结果所得p35cDNA序列与GenBank登录号M86672完全一致;所得IL-12p40cDNA序列与GenBank登录号AH004859报道完全相同,除第1000位碱基是G而不是A(但所编码氨基酸相同,都是丝氨酸)外也与GenBank登录号M86671报道相同.成功构建了小鼠IL-12单链融合基因真核表达质粒pmsIL-12,其转染COS-7细胞后的转染上清IL-12蛋白含量达(2.55±0.60)ng/ml.皮内注射pmsIL-12后,使正常小鼠脾细胞NK活性显著增强(P＜0.01),使荷H22肝癌细胞瘤小鼠的生存期明显延长(P＜0.05). 结论构建了小鼠IL-12单链融合基因的真核表达质粒,可用于基因治疗研究.