一种改进的简单快速的多位点突变方法

• 作者: 夏咸柱 张守峰 扈荣良
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬2型腺病毒E3区 多位点突变 方法
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 59-61
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2767字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.2004.01.022

摘要

为了在1个基因序列内同时实现多个位点突变,本试验以犬2型腺病毒E3医为突变目的基因,建立了一种以多个引物多聚酶链式反应为基础的简单快速的多位点突变方法.首先根据需要在E3区不同位置设计了与同一条链互补的4条突变引物,在4条引物(PBGL、PNCO、PBST、PNOT)中分别引入了BglⅡ、Nc0 I、BstB I和Not I位点,与模板链核苷酸序列相比,每条引物内均包含了2～3个突变的碱基;然后以含CAV 2 E3区基因的质粒为模板,利用高保真DNA聚合酶、dNTPs和5'末端磷酸化的4条引物,在同一个PCR反应管内进行突变PCR反应,最后以Dpn l消化反应管内模板链,取少许电激转化E.coliDH10B感受态细胞获得转化子.经上述4种内切酶对转化子DNA的酶切鉴定,证明获得了存在多种突变组合的突变基因,为进一步研究E3区不同缺失对外源基因表达的影响奠定了基础,也为其他类似研究提供了一种简单快速的突变方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张守峰	解放军军需大学军事兽医研究所	29	200	9.0	13.0
2	扈荣良	解放军军需大学军事兽医研究所	49	456	13.0	19.0
3	夏咸柱	解放军军需大学军事兽医研究所	59	634	15.0	23.0